DNR pagausinimas ne PGR būdu ir galimas panaudojimas žmogaus genomo tyrimuose

DNR pagausinimas ne PGR būdu ir galimas panaudojimas žmogaus genomo tyrimuose

Įvadas

• Genetiniai pakitimai dažnai yra pagrindinė tam tikrų ligų, tokių kaip vėžys, atsiradimo priežastis.
• Reikiamo kiekio DNR tyrimams atlikti iš žmogaus ar kito gyvo organizmo negalime gauti.
• DNR pagausinimas yra viena iš vertingiausių priemonių beveik visose gyvosios gamtos mokslų srityse, taip pat klinikinėje medicinoje.
• Polimerazės grandininę reakciją (PGR)
• Yra alternatyvių DNR pagausinimo metodų, tokių kaip, Rolling-circle amplifcation (RCA), Multiple Displacement Amplification (MDA) ir kt.
• Kilpininis izoterminis pagausinimas (angl. Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP))

LAMP metodas

• 2000 m. mokslininkas Notomi, t., et al.
• Kuom ypatingas šis metodas?
• Naudojama Bst polimerazė, išgauta iš Geobacillus stearothermophilus bakterijos.
• 60 - 75 °C
• Didelis poslinkio aktyvumas
• Izoterminėmis sąlygos.

Kokie komponentai reikalingi LAMP metodui?

• dNTP
• Mg2+
• 4-6 pradmenų
• Dviejų išorinių (F3 ir B3) pradmenų
• 2 vidinių pradmenų (priekinis vidinis pradmuo (FIP), atgalinis vidinis pradmenuo (BIP))
• Kilpos pradmenys (LF ir LB) (papildomi)
• Bst polimerazės.

Veikimo principas

Skirstoma į 3 etapus:

Notomi, Tsugunori, et al. "Loop-mediated isothermal amplification of DNA." Nucleic acids research 28.12 (2000)

Veikimo principas

Notomi, Tsugunori, et al. "Loop-mediated isothermal amplification of DNA." Nucleic acids research 28.12 (2000)

Veikimo principas

Notomi, Tsugunori, et al. "Loop-mediated isothermal amplification of DNA." Nucleic acids research 28.12 (2000)

Kaip atpažinti, kad reakcija pavyko?

• Elektroforezė agarozės gelyje
• Fluorescenciniai dažai (pvz. SYBR green)
• Plika akimi (Turbidimetrinė analizė)

Srividya, Arjuna, et al. "Loop mediated isothermal amplification: a promising tool for screening genetic mutations." Molecular Diagnosis & Therapy 23.6 (2019)

Galimas panaudojimas žmogaus genomo tyrimuose

• Net iki kopijų per mažiau negu 45 minutes.
• Pavyko aptikti taškinę mutaciją EGFR gene iš paciento sergančio plaučių adenokarcinomą.

Korektūros LAMP (Proofreading LAMP (PR‑LAMP))

• Paremtas įprastos LAMP kombinacija su DNR polimeraze turinčia stiprų 3’ – 5’ korektūros aktyvumą.

Daugiau informacijos...

★ Klientai rekomenduoja

Šį rašto darbą rekomenduoja mūsų klientai. Ką tai reiškia?

Mūsų svetainėje pateikiama dešimtys tūkstančių skirtingų rašto darbų, kuriuos įkėlė daugybė moksleivių ir studentų su skirtingais gabumais. Būtent šis rašto darbas yra patikrintas specialistų ir rekomenduojamas kitų klientų, kurie po atsisiuntimo įvertino šį mokslo darbą teigiamai. Todėl galite būti tikri, kad šis pasirinkimas geriausias!