Polimerazės grandininė reakcija (PGR)

• Polimerazinė grandininė reakcija (PGR) – tai galingas metodas, įgalinantis greitai ir dideliais kiekiais pagausinti norimą nedidelį DNR arba RNR fragmentą.
• Išskirtos iš tiriamojo individo biologinio bandinio DNR nepakanka įvairioms genetinėms manipuliacijoms arba jos analizei.
• Analizuoti dažniausiai reikia tik tam tikrą – būtent dominančią DNR molekulės dalį, o ne viso genomo DNR.
PGR tapo vienu iš svarbiausių ir sparčiausiai plintančių daugelio biologijos sričių ir laboratorinės diagnostikos metodų.
• Jis taikomas visiems moksliniams ir diagnostiniams tyrimams, kai reikia rasti, iššifruoti, palyginti ar pakeisti genetinę medžiagą.
PGR naudojama :
• Paveldimų ligų diagnostikoje;
• Infekcinių ligų diagnostikoje (ŽIV, TB, hepatitų virusų NR nustatymas);
• Imunologijoje (HLA);
• Teismo medicinoje (giminystės nustatymas, nusikaltėlio identifikacija iš biologinės medžiagos).
• 1985m.pirmą kartą “PGR” buvo aprašyta R.T.Saiki ir bendraautorių.
• Už “PGR” metodo sukūrimą K.Mullisui (JAV) 1993m.paskirta Nobelio premija.
Be polimerazės grandininės reakcijos pagrįstų DNR technologijų neįmanoma genų terapija – tai XXI amžiaus medicinos švyturys.
• PGR savo reikšme DNR tyrimams prilygsta restrikcijos fermentų atradimui ar cheminės DNR sintezės metodų sukūrimui.
• PGR PRINCIPAI IR TAIKYMO SRITYS
DNR polimerazė
• DNR polimerazė – tai
• pagrindinis DNR
• sintezės (replikacijos)
• procese dalyvaujantis
• fermentas,
• atsakingas už genetinės
• medžiagos dvigubėjimą,
• kuris įvyksta prieš
• ląstelės dalijimąsi .
Ciklinė PGR
• Kiekvieną ciklą sudaro trys etapai:
• DNR denatūravimas
• Pradmens prisijungimas
• Pradmens pratęsimas
•
• DNR polimerazei dvigubinti reikalinga ne visa DNR, o tik tam tikras fragmentas – specifinė oligonukleotidinių pradmenų pora.
• Pradmenys neturi būti komplementarūs vienas kitam, ypač 3’ dalyje,
• kad nesudarytų dupleksų
• Abiejų pradmenų nukleotidų G/C ir A/T santykis turi būti labai artimas
•
• Kad teisingai parinkti DNR fragmentą keliami tam tikri reikalavimai:
• Pradmenys turi būti specifiški DNR taikiniui
• Pradmenų sekose neturi būti komplementarių fragmentų
DNR DENATŪRAVIMAS
• DNR grandinę reikia atskirti, kad DNR fragmentas, kurį ketinama pagausinti, galėtų tapti matrica PGR
• Dvigrandė DNR denatūrojama inkubuojant 0,5 – 2 min. 92 - 96˚C temperatūroje
• 1 minutę kaitinama, kad jvyktą denatūracija (grandiniy išsiskyrimas)
• 3’
• 5’
PRADMENS PRISIJUNGIMAS
• Šio PGR etapo metu
• temperatūra yra 37-68˚C
•...

Daugiau informacijos...

★ Klientai rekomenduoja

Šį rašto darbą rekomenduoja mūsų klientai. Ką tai reiškia?

Mūsų svetainėje pateikiama dešimtys tūkstančių skirtingų rašto darbų, kuriuos įkėlė daugybė moksleivių ir studentų su skirtingais gabumais. Būtent šis rašto darbas yra patikrintas specialistų ir rekomenduojamas kitų klientų, kurie po atsisiuntimo įvertino šį mokslo darbą teigiamai. Todėl galite būti tikri, kad šis pasirinkimas geriausias!