Fermento lizocimo išskyrimas ir gryninimas iš vištos kiaušinio

Naujausių tyrimų objektas – antimikrobinio fermento lizocimo aktyvumas prieš mikroorganizmus dėl jo gebėjimo hidrolizuoti polimerus, esančius bakterijų ląstelės sienelėje, ypač tuos, kurie priklauso gram (+) grupei (Phillips, 1967). Atlikus tyrimus taip pat buvo pranešta apie fermento lizocimo gebėjimą hidrolizuoti grybų ir mielių ląstelių sienelę (Manikandan ir kt., 2015; Zhou ir kt., 2017; Hernández-Téllez ir kt., 2018).
Šio darbo tikslas – išnagrinėti fermento lizocimo išskyrimo ir gryninimo procesą bei aptarti galimas metodų ir aparatūros alternatyvas.
1. Aptarti fermento lizocimo savybes ir šaltinius.
2. Išnagrinėti mokslinėje literatūroje aprašytą lizocimo gryninimo procesą.
3. Pateikti gryninimo metodų alternatyvų bei jas argumentuoti.
Lizocimas yra hidrolazių šeimos fermentas. Jis katalizuoja β‑1,4‑glikozidinių ryšių hidrolizę tarp N‑acetilmuramino rūgšties ir N‑acetilgliukozamino liekanų bakterijų ląstelės sienelės mureinų polisacharidinėse grandinėse ir taip ardo bakterijų ląsteles (Guana ir kt., 2019; Shahmohammadi, 2017).
1 pav. Lizocimo iš kiaušinio baltymo erdvinė struktūra
Lizocimo randama augaluose ir gyvūnuose, bet daugiausiai randama vištos kiaušinio baltyme, apie 3–4 %. Tai yra didžiausias kiekis lyginant su kitais organiniais šaltiniais, todėl būtent kiaušinio baltymas yra geriausias šaltinis lizocimui gryninti (Chiu ir kt., 2012; Zhu ir kt., 2016).
Lizocimas, dėl savo antibakterinių sąvybių, plačiai naudojamas farmacijos ir maisto pramonėje kaip antimikrobinis agentas ir maisto konservantas. Tačiau pastebėta, kad jis turi panašių sąvybių kaip fungistatiniai ir priešnavikiniai vaistiniai preparatai, taip pat slopina ŽIV replikaciją (Zhiu ir kt., 2016).
Fizikocheminės sąvybės (Worthington. Biochemical Corporation):
• Molekulinė masė: 14,3 kDa
• Optimalus pH: 6,0–9,0
• Izoelektrinis taškas: 9,32
• Ekstinkcijos koeficientas: 38,940 cm-1 M-1
2. GRYNINIMO PROCESAS
Šioje referato dalyje aptariamas fermento lizocimo gryninimo procesas bei taikytos sąlygos. Gryninant šį fermentą kiaušinio trynys nuo baltymo buvo atskirtas putų frakcionatoriumi, buvo atlikta jonų mainų chromatografija, galutinis produktas gautas atlikus eliuciją (Recio, 1999). Visa šių metodų aparatūrinė schema pateikiama 2 pav.
2 pav. Aparatūrinė schema
2.1. Baltymų kiekio nustatymas Bradford metodu
Baltymų koncentracija buvo nustatyta atliekant Bradford metodą (Bradford, 1976) su Bio-Rad baltymų tyrimo dažu ties 595 nm naudojant standartinę lizocimo kreivę.
2.2. SDS-PAGE...

Daugiau informacijos...

★ Klientai rekomenduoja

Šį rašto darbą rekomenduoja mūsų klientai. Ką tai reiškia?

Mūsų svetainėje pateikiama dešimtys tūkstančių skirtingų rašto darbų, kuriuos įkėlė daugybė moksleivių ir studentų su skirtingais gabumais. Būtent šis rašto darbas yra patikrintas specialistų ir rekomenduojamas kitų klientų, kurie po atsisiuntimo įvertino šį mokslo darbą teigiamai. Todėl galite būti tikri, kad šis pasirinkimas geriausias!