Genų raiškos tyrimai panaudojant ląstelių kultūras ir ekstraktus

Informacijos apie genų raišką gaunama atliekant tyrimus RNR ir/ar baltymo lygmenyse, panaudojant atitinkamus tyrimo metodus. Esminiai pastarųjų parametrai, kuriais jie vieni nuo kitų skiriasi, yra jų skiriamoji geba (įvertinama genų raiška ekstraktuose iš įvairių audinių mišinio  vieno audinio  ląstelių grupės  vienos ląstelės) ir našumas (kelių genų raiška yra tiriama vienu metu).
Nothern blot hibridizacija: nedidelės skiriamosios gebos metodas tirti RNR raišką, naudojant RNR ar kDNR ekstraktus, fiksuotas ląsteles ar audinius. Elektroforetiškai frakcionuota pagal RNR (ar kDNR) yra pernešama ant specialios membranos ir hibridizuojama su zondu (oligonukleotidas, specialiu būdu pažymėtas, geno seka ar kDNR). Skirtingo dydžio NR buvimas tam pačiame takelyje, gali rodyti skirtingo dydžio izoformas.
Hibridizacija audiniuose in situ: didelės skiriamosios gebos metodas, suteikiantis informacijos apie geno raišką erdvėje. Šaldyto ar parafine fiksuoto audinio mėginys yra plonai supjaustomas (5 m storio). Toks preparatas ant objektinio stiklelio yra hibridizuojamas su reikiamu zondu, specifiniu tam tikrai mRNR. Gaunama informacija apie mRNR pasiskirstymą tam tikrame audinyje. Dažnai naudojami embrioniniai preparatai, kadangi jų pjūvyje iškart yra keli audiniai. Norint padidinti jautrumą, naudojama priešprasmis ribozondas (pažymėta priešprasmė RNR, gaunama in vitro nurašymo būdu nuo atitinkamos kDNR). Naudojami ir oligonukleotidų zondai.
RNR raiškos ląstelių populiacijoje ar pavienėje ląstelėje tyrimas: specialiai pažymėtais zondais aptinkama tam tikros sekos RNR atskirų ląstelių lygyje ir identifikuojami RNR brendimo, transporto ir citoplazminės lokalizacijos vietos. Naudojant kiekybinę FISH ir mikroskopiją su skaitmeniniu vaizdo apdorojimu, įmanoma pamatyti atskirus RNR nuorašus in situ. Svarbu pasiruošti grynas reikiamų ląstelių populiacijas – vis dažniau tam naudojami lazeriu gauti audinių mikropjūviai.
Dauginis ar viso genomo raiškos tyrimas naudojant DNR mikroschemų (lustų) technologiją (DNA chip technology): technologijos esmė – labai tankūs ir smulkūs oligonukleotidų ar DNR klonų masyvai ant stiklinių (ar plastikinių) paviršių. Atliekant dauginę genų raiškos analizę, sukuriamas toks masyvas, kuriame tyrėją dominančių genų yra kDNR klonai ar genams specifiniai oligonukleotidai. Tada iš tiriamų ląstelių paruošiamas RNR mėginys,...

Daugiau informacijos...

★ Klientai rekomenduoja

Šį rašto darbą rekomenduoja mūsų klientai. Ką tai reiškia?

Mūsų svetainėje pateikiama dešimtys tūkstančių skirtingų rašto darbų, kuriuos įkėlė daugybė moksleivių ir studentų su skirtingais gabumais. Būtent šis rašto darbas yra patikrintas specialistų ir rekomenduojamas kitų klientų, kurie po atsisiuntimo įvertino šį mokslo darbą teigiamai. Todėl galite būti tikri, kad šis pasirinkimas geriausias!