DNR elektroforezė

DNR ELEKTROFOREZĖ

Darbo planas

■ DNR struktūra ir tyrimo metodai.

■ Elektroforezės kaip tyrimo metodo taikymas DNR tyrimams. Agarozės geliai.

■ E-Gel® iBase™ Power System technologija - greita DNR analizė.

■ DNR preparato paruošimas, DNR kiekio įvertinimas.

■ DNR pavyzdžio užnešimas ant agarozės gelio.

■ Rezultatų įvertinimas.

DNR STRUKTŪRA

■ Eukariotų DNR yra dvigrandė komplementarių poliribonukloetidų molekulė.

■ Prokariotų DNR yra žiedinė dvigrandė molekulė.

■ Plazmidė – prokariotų (bakterijų) žiedinė DNR.

■ Dėl neigiamo krūvio, kurį suteikia fosfatų grupės, ląstelės branduolyje sukaupta DNR yra sujungta su baltymais.

■ DNR ir baltymų kompleksai vadinami chromatinu.

■ Iš chromatino formuojasi chromosomos.

DNR STRUKTŪRA PROKARIOTUOSE

BAKTERINĖS LĄSTELĖS SCHEMA

Plazmidės yra žiedinės nedidelės masės DNR molekulės, esančios už bakterijų nukleoido ribų.

DNR TYRIMO ETAPAI

■ DNR išgavimas

■ DNR išskyrimas

■ DNR gryninimas

■ DNR kokybės (dydžio, sekos) tyrimas

■ DNR kokybės tyrimo metodai

Sekoskaita (sekvenavimas)

Elektroforezė

Hibridizacija

DNR elektroforezė

■ Elektroforezė – krūvį turinčių (įkrautų)

molekulių judėjimas elektriniame lauke.

■ Priklauso nuo jų krūvio, dydžio ir

konformacijos.

■ Nukleorūgštys (NR) turi neigiamą krūvį, kurį

lemia fosfatinės grupės. Todėl elektriniame

lauke nukleorūgštys juda link anodo,

molekulių judėjimo greitis šiuo atveju

priklauso vien tik nuo NR dydžio.

■ Elektroforezės metodu efektyviai galima

atskirti molekules iki ~ 20 kb dydžio.

■ Plačiai taikoma molekulinėje biologijoje, PGR

produktų analizėje.

NR judėjimas elektriniame lauke

■ NR gelyje juda “biased reptation” modeliu - molekulių migracija nukreipta link taikomos elektrinės jėgos ir juda “vinguriuodama”, pirmaujantis kraštas “tempia” likusią molekulės dalį.

■ Šis modelis taip pat buvo vizualizuotas fluorescentinės mikroskopijos pagalba.

http://www.biologydiscussion.com/biochemistry/electrochemical-

techniques/top-10-types-of-electrophoretic-techniques-used-in-

biochemistry/12669

https://www.softmatter.physik.uni-

muenchen.de/raedler_group/supportedmembranes/conformational.jpg

DNR būsena elektroforezės metu

■ Dažniausiai elektriniame lauke DNR juda ilgos

lazdelės forma, tokiu atveju migracija priklauso

nuo molekulės ilgio.

■ Vienodo dydžio žiedinės formos DNR

(plazmidės) gali dėstytis gelyje ir dviem

fragmentais, nes jų judėjimas elektriniame lauke

priklauso, ar plazmidė yra išsivyniojusi ar labai

Daugiau informacijos...

★ Klientai rekomenduoja

Šį rašto darbą rekomenduoja mūsų klientai. Ką tai reiškia?

Mūsų svetainėje pateikiama dešimtys tūkstančių skirtingų rašto darbų, kuriuos įkėlė daugybė moksleivių ir studentų su skirtingais gabumais. Būtent šis rašto darbas yra patikrintas specialistų ir rekomenduojamas kitų klientų, kurie po atsisiuntimo įvertino šį mokslo darbą teigiamai. Todėl galite būti tikri, kad šis pasirinkimas geriausias!