β-galaktozidazės iš Kluyveromyces fragilis specifinio aktyvumo nustatymas

Nustatyti β-galaktozidazės specifinį aktyvumą.
β-galaktozidazės iš Kluyveromyces fragilis tirpalas „Lactozym 3000L“ (Novo Nordisk).
Spektrofotometras, termostatas, verdančio vandens vonia, mikropipetės.
Reagentai
1. 208 mM laktozės tirpalas 0,1 M kalio fosfatiniame buferyje pH 6,5.
2. 400 kartų skiestas β-galaktozidazės preparato „Lactozym 3000L“ tirpalas 0,1 M kalio fosfatiniame buferyje pH 6,5.
3. 80000 kartų skiestas β-galaktozidazės preparato „Lactozym 3000L” tirpalas 0,1 M kalio fosfatiniame buferyje pH 6,5.
4. Gliukozooksidazinis-peroksidazinis reagentas.
5. Bradfordo reagentas.
Darbo eiga
β-galaktozidazės aktyvumo nustatymas.
Į mėgintuvėlį įpilama 2 mL 208 mM laktozės tirpalo, pašildoma 5 min. 37 °C temperatūroje, supilamas 1 mL 80 000 kartų skiestas β-galaktozidazės tirpalas, sumaišoma ir inkubuojama 30 min. 37 °C temperatūroje. Reakcija sustabdoma įstatant mėgintuvėlį su reakcijos mišiniu į verdančio vandens vonią 5 min. Lygiagrečiai paruošiamas kontrolinis bandymas su neaktyviu fermentu. 1 mL 80 000 kartų skiesto β-galaktozidazės tirpalo kaitinama verdančio vandens vonioje 5 min. Paskui įpilama 2 mL 208 mM laktozės tirpalo ir inkubuojama 30 min. 37 °C temperatūroje.
Susidariusi gliukozė matuojama gliukozooksidaziniu-peroksidaziniu reagentu (gliukozooksidazė,
o-dianizidinas, peroksidazė). Imama 0,5 mL reakcijos mišinio, sumaišoma su 3 mL šio reagento ir
inkubuojama 30 min. 37 °C temperatūroje. Kontrolei: 0,5 mL reakcijos mišinio iš kontrolinio bandymo su
neaktyviu fermentu, 3 mL...

Daugiau informacijos...

★ Klientai rekomenduoja

Šį rašto darbą rekomenduoja mūsų klientai. Ką tai reiškia?

Mūsų svetainėje pateikiama dešimtys tūkstančių skirtingų rašto darbų, kuriuos įkėlė daugybė moksleivių ir studentų su skirtingais gabumais. Būtent šis rašto darbas yra patikrintas specialistų ir rekomenduojamas kitų klientų, kurie po atsisiuntimo įvertino šį mokslo darbą teigiamai. Todėl galite būti tikri, kad šis pasirinkimas geriausias!